Técnica de clonación 3D aplicada en planificación quirúrgica para craneosinostosis sagital en Latinoamérica-Perú: reporte de caso

La craneosinostosis sagital es el cierre prematuro de la sutura sagital, ocasionando alteraciones funcionales y estructurales. El tratamiento es quirúrgico, y actualmente se cuenta con diversas técnicas, las cuales requieren de una planificación y entrenamiento para lograr óptimos resultados. Se presenta el caso de un varón de 1 año presenta crecimiento anteroposterior anormal del cráneo, indicándose tomografía cerebral sin contraste evidenciando una sinostosis sagital. Se realiza la planificación quirúrgica de la técnica a desarrollar mediante modelo 3D personalizado a escala real. Paciente cursa con buena evolución y es dado de alta. Finalmente, la tecnología de clonación 3D esencial para la educación y desarrollo neuroquirúrgico permitiendo acceder a modelos táctiles de alta precisión y bajo costo que mejoran la calidad del manejo de craneosinostosis.

Sagittal craniosynostosis is the premature closure of the sagittal suture, causing functional and structural alterations. The treatment is surgical, and there are currently various techniques, which require planning and training to achieve optimal results. We present the case of a 1-year-old male with abnormal anteroposterior growth of the skull, indicating brain tomography without contrast, showing sagittal synostosis. Surgical planning of the technique to be developed is carried out using a real-scale personalized 3D model. The patient progresses well and is discharged. Finally, essential 3D cloning technology for neurosurgical education and development allows access to high-precision, low-cost tactile models that improve the quality of craniosynostosis management.

Efficiency of transgene expression in bovine cells varies according to cell type and gene transfer method / La eficiencia de la expresión transg é nica en células bovinas varía según el tipo de célula y el método de la transferencia de genes / A eficiência da expressão do transgene em células bovinas varia de acordo com o tipo celular e o método de transferência gênica

Abstract Background: Production of transgenic animals is still a low-efficiency biotechnology, and simple alternatives should be used to improve the rate of transgenic bovine production by nuclear transfer. One such alternative is selecting the appropriate donor cell type and transfection method. Objective: To investigate the effect of cell type (fetal or adult fibroblasts, and cumulus cells), and gene transfer method (lipofection and lentiviral transduction) on the incorporation, expression, and fluorescence intensity of transgene on bovine cells analyzed by flow cytometry. Methods: Fetal fibroblasts (FF), adult fibroblasts (AF), and cumulus cells (CC) were transfected using lipofection, or transduced using lentiviral particles produced with Green Fluorescent Protein (GFP) expressing plasmids, and analyzed by flow cytometry. Results: Lentiviral transduction resulted in higher transgene expression rates for all cell types (FF: 88.8 ± 0.98; AF: 91.6 ± 2.96; CC: 60.7% ± 14.7) compared to lipofection (FF: 17.8 ± 2.82; AF: 10.66 ± 0.65; CC: 3.9% ± 1.97). Cumulus cells showed lower transgene expression rates than the other cell types. Regarding fluorescence intensity, there was no significant difference between lipofection and lentiviral transduction; in both treatments, higher fluorescence intensity was obtained when adult cells were used instead of fetal cells. Conclusion: Gene transfer efficiency varies according to cell type, and gene transfer method, with lentiviral transduction achieving higher transgene expression rate, and adult fibroblasts showing better transgene expression.

Resumen Antecedentes: La producción de animales transgénicos sigue siendo una biotecnología de baja eficiencia, y se deberían utilizar alternativas sencillas para mejorar la tasa de producción de bovinos transgénicos mediante transferencia nuclear. Una de estas alternativas es la selección del tipo mas apropiado de célula donante y método de transferencia génica. Objetivo: Investigar el efecto del tipo celular (fibroblastos fetales o adultos, y celulas del cumulus), y el método de transferencia génica (lipofección y transducción lentiviral) en la incorporación, expresión génica, y la intensidad de fluorescencia del transgén en células bovinas analizadas por citometría de flujo. Métodos: Fibroblastos fetales (FF), fibroblastos adultos (AF), y células del cúmulo (CC) fueron transfectados a través de lipofección o transducidos utilizando partículas lentivirales producidas con plásmidos que expresan la proteína verde fluorescente (GFP). Resultados: La transducción lentiviral dio lugar a mayores tasas de expresión del transgen en todos los tipos de células (FF: 88,8 ± 0,98; AF: 91,6 ± 2,96, CC: 60,7% ± 14,7) en comparación con la lipofección (FF: 17,8 ± 2,82; AF: 10,66 ± 0,65; CC: 3,9% ± 1,97). Las células del cúmulus mostraron menores tasas de expresión del transgen que los otros tipos celulares. En cuanto a la intensidad de fluorescencia, no hubo diferencias significativas entre lipofección y transducción lentiviral; en ambos tratamientos, se obtuvo una mayor intensidad de fluorescencia cuando se usaron células adultas en lugar de células fetales. Conclusión: La eficiencia de la transferencia de genes varía según el tipo de célula y el método de transferencia génica, con la transducción lentiviral se logra una mayor tasa de transfección, y los fibroblastos adultos muestran una mejor expresión transgénica.

Resumo Antecedentes: A produção de animais transgênicos é uma biotecnologia que ainda apresenta baixa eficiência e alternativas simples devem ser usadas para o aumento da produção de bovinos transgênicos por transferência nuclear. Uma destas alternativas compreende a seleção do tipo apropriado de célula doadora de núcleo e do método de transferência gênica. Objetivo: Investigar a influência do tipo celular (fibroblastos fetais ou adultos, e células do cumulus), e do método de transferência gênica (transfecção por lipofecção ou transdução lentiviral) na incorporação, expressão, e na intensidade de fluorescência do transgene em células bovinas analisadas por citometria de fluxo. Métodos: Fibroblastos fetais (FF), fibroblastos adultos (AF), e células do cumulus (CC) foram submetidas à lipofecção ou à transfecção lentiviral utilizando plasmídeos expressando a Proteína Fluorescente Verde - GFP). Resultados: A transdução lentiviral resultou em maiores taxas de expressão do transgene em todos os tipos celulares (FF: 88,8 ± 0,98; AF: 91,6 ± 2,96; CC: 60,7% ± 14.7) quando comparada com a lipofeccção (FF: 17,8 ± 2,82; AF: 10,66 ± 0,65; CC: 3,9% ± 1,97). As células do cumulus apresentaram menores taxas de expressão quando comparadas aos outros tipos celulares. Com relação à intensidade de fluorescência, não houve diferença significativa entre a lipofecção e a transdução lentiviral e em ambos os tratamentos as células adultas apresentaram maior intensidade de fluorescência do que as células fetais. Conclusão: A eficiência de transferência gênica varia de acordo com o tipo celular, e com o método de transferência gênica, sendo que a transdução lentiviral resultou em maiores taxas, e que os fibroblastos adultos mostraram melhor expressão do transgene.

Algunas consideraciones sobre la transferencia mitocondrial: ¿un nuevo problema para la bioética? / Some thoughts on the mitochondrial transfer: a new issue for bioethics? / Algumas considerações sobre a transferência mitocondrial: um novo problema para a bioética?

En febrero de 2015 el Reino Unido dio el primer paso para la aprobación de la transferencia mitocondrial como técnica terapéutica. Teóricamente, gracias a eso será posible para muchas mujeres engendrar descendencia libre de patologías asociadas a defectos mitocondriales. Sin embargo, esta práctica enfrenta severas dudas desde un punto de vista ético. Entre las objeciones destacan: su estrecha vinculación con la clonación humana; la alteración de los genes de la línea germinal; la modificación de la identidad del ser humano al que dará lugar; la destrucción de embriones humanos que envuelve, o el elevado riesgo que encierra para la salud del ser humano resultante. En este texto se analiza la solvencia de todas estas objeciones de forma crítica, resaltando las fortalezas de algunas de ellas. En particular, se aboga por una restricción cuidadosa del uso de esta técnica, que promueva el empleo de alternativas más respetuosas con la salud del futuro ser humano.

In February 2015 the United Kingdom took the first step towards the adoption of mitochondrial transfer as a therapeutic technique. Theoretically, it will make it possible for many women to get rid of pathologies associated with mitochondrial defects. However, this practice has been subjected to severe doubts from an ethical standpoint. Among these objections, we could highlight the following: its close association with human cloning; the alteration of the germline genes; the modification in the identity of the human being involved; the destruction of human embryos; or the high risk to the health of the human being. In this text we will analyze these objections critically, highlighting the strength of all of them. As a result, we will call for a careful restriction of the use of this technique, and the promotion of the use of alternative options much more respectful of the human future.

Em fevereiro de 2015 o Reino Unido deu o primeiro passo para a aprovação da transferência mitocondrial como técnica terapêutica. Teoricamente, graças a isso será possível a muitas mulheres engendrar descendência livre de patologias associadas a defeitos mitocondriais. No entanto, esta prática enfrenta severas dúvidas a partir de um ponto de vista ético. Entre as objeções destacam: sua estreita vinculação com a clonagem humana; a alteração dos genes da linha germinal; a modificação da identidade do ser humano ao qual dará lugar; a destruição de embriões humanos que envolve, ou o elevado risco que encerra para a saúde do ser humano resultante. Neste texto se analisa a solvência de todas estas objeções de forma crítica, ressaltando as fortalezas de algumas delas. Em particular, se advoga por uma restrição cuidadosa do uso desta técnica, que se promova o emprego de alternativas mais respeitosas com a saúde do futuro ser humano.

Clonación de secuencias de alfavirus y flavivirus para su uso como controles positivos en el diagnóstico molecular / Cloning alphavirus and flavivirus sequences for use as positive controls in molecular diagnostics

RESUMEN El objetivo de la investigación fue obtener controles positivos para la validación de técnicas moleculares (RT-PCR) utilizadas en diagnóstico e investigación de infecciones virales. A partir de cepas de CHIKV, Zika, DENV-1, DENV-2, DENV-3 y DENV-4, se extrajeron ARN virales para obtener por RT-PCR los ADN complementarios (ADNc) de las secuencias nsP4 (CHIKV), NS5 (virus Zika), C/prM-M y 5´UTR-C (DENV-1, DENV-2, DENV-3, DENV-4) que fueron clonados en pGEM®-T Easy. La clonación se confirmó mediante PCR de colonias, de las cuales se extrajo el ADN plasmídico para la verificación de la clonación de los fragmentos. Se logró la clonación de ADNc correspondientes a nsP4, NS5, C/prM-M y 5´UTR-C de los distintos agentes virales. En conclusión se obtuvieron los plásmidos recombinantes con cada una de las secuencias especificadas para su posterior valoración como controles positivos en técnicas moleculares, evitando el uso de cultivos celulares que pueden resultar costosos, laboriosos y potencialmente peligrosos.

ABSTRACT The purpose of the study was to obtain a positive control to validate molecular techniques (reverse transcription- polymerase chain reaction [RT-PCR]) used in the diagnosis and research of viral infections. From strains of Chikungunya virus (CHIKV), Zika virus, and Dengue virus (DENV-1, DENV-2, DENV- 3, and DENV-4) viral RNAs were extracted to obtain complementary DNA using RT-PCR from the nsP4 (CHIKV), NS5 (Zika virus), C/prM-M, and 5′UTR-C (DENV-1, DENV-2, DENV-3, DENV-4) sequences, which were cloned into pGEM®-T Easy. Cloning was confirmed through colony PCR, from which plasmid DNA was extracted for fragment cloning verification. Cloning of cDNA corresponding to nsP4, NS5, C/prM-M, and 5′UTR-C of the different viral agents was achieved. In conclusion, recombinant plasmids were obtained with each of the sequences specified for further assessment as positive controls in molecular techniques in an effort to avoid the use of cell cultures, which can be costly, time-consuming, and potentially dangerous.

New technologies in biomedicine. Opinions of young Romanian physicians / Nuevas tecnologías en biomedicina. Opiniones de médicos jóvenes de Rumania / Novas tecnologias em biomedicina. Opiniões de jovens médicos romenos

Aim. The purpose of this article is to summarize the way young medical professionals view these modern biomedical procedures and their moral acceptability. Materials and methods. A survey, filled in online, analyzing items in four main areas: genetic techniques, cloning, stem cell research, and assisted reproduction. Results. Genetics related items. Most subjects agreed that the right to the genetic material should be a fundamental human right and that genetic engineering should be used if it could lead to the elimination os severe genetic diseases like cystic fibrosis and thalassemia. The least acceptance rate was obtained for techniques that would either change physical traits (like eye or hair color) or augment them. Assisted reproductive techniques. Most subjects agreed that the prenatal screening should be mandatory, and if the screening detects a severe congenital malformation the physician should recommend therapeutic abortion. Cloning. Most subjects disagreed that cloning of any type, either therapeutic or reproductive, using human, animal, or vegetal genetic material. Stem cell research. Most subjects agreed with the collection and storage of cord blood stem cells and the use of adult stem cells, and most of them disagreed with the creation of embryos specifically for obtaining stem cells. Conclusions. Even if the national legislation in this area is very scarce, the responses have usually identified the highly controversial techniques. If however the national legislation has elements similar to the items from the survey, they tended to take the respective items as morally acceptable without trying to analyze them critically.

Objetivo. El propósito de este artículo es recoger la forma en que jóvenes profesionales médicos ven los procedimientos biomédicos modernos y su aceptabilidad moral. Materiales y métodos: Una encuesta, rellenada online, que analiza elementos en cuatro áreas principales: técnicas genéticas, clonación, investigación con células madre y reproducción asistida. Resultados: Elementos relacionados con la genética: La mayoría de los sujetos acepta que el derecho a material genético debería ser un derecho humano fundamental y que la ingeniería genética debería usarse si pudiese eliminar enfermedades genéticas severas como la fibrosis quística y la talasemia. Se obtuvo una frecuencia de aceptación menor para técnicas que pudieran o cambiar características físicas (como el color de los ojos o del pelo) o aumentarlas. Técnicas de reproducción asistida: La mayoría de los sujetos acepta que el examen de detección prenatal debiera ser mandatorio y si se detecta una deformación congénita severa, el médico debería recomendar aborto terapéutico. Clonación: La mayoría de los sujetos no acepta clonación de ningún tipo, terapéutica o reproductiva, usando material genético humano, animal o vegetal. Investigación con células madre: La mayoría de los sujetos acepta recoger y almacenar células madre del cordón umbilical y el uso de células madre adultas y está en desacuerdo con la creación de embriones específicamente para obtener células madre. Conclusiones: aunque la legislación nacional en esta área es muy escasa, las respuestas por lo general han identificado las técnicas altamente controversiales. Sin embargo, si la legislación nacional tiene elementos similares a los temas de la encuesta, se tiende a tomarlos respectivamente como moralmente aceptables sin tratar de analizarlos críticamente.

Objetivo. A proposta deste artigo é sumarizar o modo de ver dos jovens profissionais médicos sobre procedimentos biomédicos modernos e sua aceitação moral. Materiais e métodos. Uma pesquisa de opinião realizada online, analisou ítens de quatro principais áreas: técnicas genéticas, clonagem, pesquisa com células-tronco, e reprodução assistida. Resultados. Itens relacionados à Genética. A maioria dos sujeitos concordaram que o direito ao material genético deveria ser um direito humano fundamental e que a engenharia genética poderia ser usada se puder levar à eliminação de doenças genéticas severas como a fibrose cística e a talassemia. A menor taxa de aceitação foi obtida para técnicas que pudessem modificar o aspecto físico individual (como olho e cor do cabelo) ou aumentá-los. Técnicas de reprodução assistida. A maioria dos sujeitos concordaram que a seleção pré-natal (screening) deverá ser impositiva, e que se o "screening" detetar uma severa malformação congênita o médico deveria recomendar o aborto terapêutico. Clonagem. A maioria dos sujeitos discordaram da clonagem de qualquer tipo, terapêutica ou reprodutiva, com material genético de uso humano, animal, ou vegetal. Pesquisa com células-tronco. A maioria dos sujeitos concordaram com a obtenção e estocagem de células-tronco de sangue do cordão umbilical e a utilização de células-tronco adultas , e a maioria deles discordaram da criação de embriões especificamente para a obtenção de células-tronco. Conclusões. Mesmo que a legislação nacional na área seja muito escassa, as respostas usualmente identificaram as técnicas como altamente controversas. Quando a legislação nacional oferece elementos semelhantes aos ítens obtidos pela pesquisa de opinião, eles tenderiam a tomar os respectivos ítens como moralmente aceitáveis sem tentar analisá-los criticamente.

PfGBP: una proteína de unión al telómero de Plasmodium falciparum / PfGBP: A Plasmodium falciparum telomere binding protein / PfGBP: uma proteína de ligação o telômero em Plasmodium falciparum

Los telómeros son estructuras complejas de ADN y proteína localizadas en el extremo de los cromosomas eucariotes. Su principal función es proteger el extremo cromosomal de ser reconocido y procesado como ADNs fracturado, evitando así eventos de recombinación y fusión que conducen a inestabilidad cromosomal. El ADN telomérico consta de secuencias cortas, repetidas una tras otra, ricas en guanina; la cadena rica en guanina se extiende formando una región de cadena sencilla denominada extremo 3' protuberante. Las proteínas por su parte, se pueden clasificar en: dsBPs, o proteínas de unión a la cadena doble, GBPs aquellas que reconocen específicamente el extremo protuberante y, proteínas que las interconectan mediante interacciones proteína-proteína. El gen PF3D7_1006800 de Plasmodium falciparum codifica para una proteína putativa similar a una GBP de Criptosporidium parvum, con el fin de establecer si esta proteína de P. falciparum presenta la capacidad de unión al ADN telomérico del parásito, se produjo una proteína recombinante a partir de la región codificante del gen, se purificó y se utilizó en ensayos de unión a ADN, y en la generación de anticuerpos policlonales específicos contra PfGBP. Nuestros resultados indican que la proteína de P. falciparum es una proteína nuclear con capacidad de unión al ADN telomérico in vitro, por lo que podría ser parte del complejo proteico encargado de proteger y/o mantener el telómero in vivo.

Telomeres are specialized structures at the end of chromosomes that consist of repetitive DNA sequences and associated proteins. The primary role of telomeres is to protect the end of linear chromosomes from recombination, fusion, and recognition as broken DNA ends. This protective function can be achieved through association with specific telomere binding proteins. Telomeric DNA consists of G-rich double-stranded arrays followed by a single-stranded G-rich overhang. The telomeric proteins can be classified in dsBPs, which bind double-stranded DNA, GBPs those that bind specifically to G-rich overhang, and proteins that interact with telomeric factors. Plasmodium falciparum gene PF3D7_1006800 codifies for a protein highly similar to Cryptosporidium parvum GBP. In order to investigate whether the P. falciparum protein binds telomeric DNA, a recombinant protein was produced, purified and DNA binding assays were performed. Polyclonal antibodies against rPfGBP were produced and tested in western blot. Our results indicate that PfGBP is a nuclear protein that binds telomeric DNA in vitro, which could be part of the protein complex responsible for protecting and/or maintaining the telomere in vivo.

Os telómeros são estruturas complexas de DNA e proteína localizadas no extremo dos cromossomas dos eucariotas. Sua principal função é proteger o extremo dos cromossomas para que não sejam reconhecidos e processados como DNAs fraturados. O anterior evita eventos de recombinação e fusão que conduzem à instabilidade nos cromossomas. O DNA telomérico tem sequencias curtas e repetidas, ricas em guanina. A cadeia rica em guanina estende-se para formar uma região de cadeia simples chamada extremo 3' protuberante. As proteínas podem-se classificar em: dsBPs ou proteínas de união à cadeia dupla, GBPs que são as que reconhecem especificamente o extremo protuberante e, as proteínas que interligam mediante interações proteína-proteína. O gene PF3D7_1006800 de Plasmodium falciparum codifica para uma proteína similar a uma GBP de Criptosporidium parvum. Com o objetivo de estabelecer se a proteína de P. falciparum presenta a capacidade de união ao DNA telomérico, foi produzida uma proteína recombinante partindo da região codificante do gene, purificou-se e utilizou-se nos ensaios de união ao DNA e na geração de anticorpos policlonais específicos contra PfGBP. Os nossos resultados indicam que a proteína de P. falciparum é uma proteína nuclear com capacidade de união ao DNA telomérico in vitro, pelo que poderia fazer parte do complexo proteico encarregado de proteger e/ou manter o telómero in vivo.

Aspectos bioéticos en el ejercicio actual de la genética humana / Bioethical aspects in current human genetics

En los últimos años las ciencias de la vida y la salud han conseguido hitos importantes permitiendo el surgimiento la ingeniería genética, la genética médica y la genómica, ramas que plantean la necesidad de criterios científicos y técnicos basados en la conducta y labor de sus profesionales. Es así que consideramos importante reflexionar desde el punto de vista bioético los siguientes temas: Las pruebas de paternidad, que tienen como objeto determinar el vínculo genético ascendente en primer grado entre un individuo y su progenitor masculino. El tamiz de portadores que se utiliza para determinar si una persona es portadora de una enfermedad genética, suele aplicarse a heterocigotos para un gen recesivo, en reordenamientos cromosómicos. La eugenesia, concebida como una ideología social, como ciencia es la rama de la manipulación genética que estudia el perfeccionamiento de la especie humana. La clonación humana, ha demostrado que se puede reprogramar una célula diferenciada de un individuo adulto, convirtiendo una célula altamente especializada en un embrión y hacerla volver atrás en su programa genético, obteniendo así un ser idéntico al primero. Como profesionales de la salud preservamos la vida, sin olvidar que debemos tratar de ofrecer una adecuada calidad de la misma a nuestros pacientes y dentro de condiciones éticas.

Nowdays, the life and health sciences have achieved significant milestones allowing the emergence of new branches, such as genetic engineering, molecular genetics, medical genetics and genomics, which pose scientific and technical criteria to sort and conduct their professional work. Thus, we consider important to analyze and reflect from the bioethical standpoint advances in the field of human genetics, addressing the following topics: Paternity tests, studies that are intended to determine the genetic link up (kinship) in the first degree between an individual and his male parent. The carrier screening used to determine whether a person is a carrier of a genetic disease, usually applied to individuals heterozygous fora recessive gene, or individuals heterozygous fora dominant gene that do notexpress the disease and chromosomal rearrangements. Eugenics, conceived as a social ideology, is defined as improving a species, as a science is the branch of genetic engineering that studies the improvement of the human species. Human cloning is a topic that generates more discussion not only from an ethical view, but also philosophical and religious points of view, since it has been shown that you can reprogram a differentiated cell of an adult, becoming a highly specialized cell into an embryo and make it go back in their genetic program, thus obtaining identical to the first one. As health professionals, we try to preserve life, not forgetting that we should give adequate quality of life to our patients with ethical conditions.

The ethics of reviving long extinct species.

There now appears to be a plausible pathway for reviving species that have been extinct for several decades, centuries, or even millennia. I conducted an ethical analysis of de-extinction of long extinct species. I assessed several possible ethical considerations in favor of pursuing de-extinction: that it is a matter of justice; that it would reestablish lost value; that it would create new value; and that society needs it as a conservation last resort. I also assessed several possible ethical arguments against pursuing de-extinction: that it is unnatural; that it could cause animal suffering; that it could be ecologically problematic or detrimental to human health; and that it is hubristic. There are reasons in favor of reviving long extinct species, and it can be ethically acceptable to do so. However, the reasons in favor of pursuing de-extinction do not have to do with its usefulness in species conservation; rather, they concern the status of revived species as scientific and technological achievements, and it would be ethically problematic to promote de-extinction as a significant conservation strategy, because it does not prevent species extinctions, does not address the causes of extinction, and could be detrimental to some species conservation efforts. Moreover, humanity does not have a responsibility or obligation to pursue de-extinction of long extinct species, and reviving them does not address any urgent problem. Therefore, legitimate ecological, political, animal welfare, legal, or human health concerns associated with a de-extinction (and reintroduction) must be thoroughly addressed for it to be ethically acceptable.

Descrubrimientos sobre reprogramación nuclear merecen el premio Nobel en 2012 / Discoveries on nuclear reprogramming deserves the Nobel prize in 2012

Este artículo fue escrito para honrar a J.B Gurdon y S. Yamanaka, laureados con el Premio Nobel en Fisiología p Medicina 2012 "por el descubrimiento de que las células maduras pueden ser reprogramadas para volverse pluripotentes". Se presentan en forma concisa sus aportes científicos y reseñas biográficas. J.B. Gardon, en Inglaterra, demostró hace 50 años en anfibios que al trasplantar el núcleo de una célula intestinal a un huevo u ovocito enuncleado se obtiene una célula totipotente que se convierte en un embrión y se desarrolla hasta convertirse en una rana adulta, lo cual implica la conservación de genoma en el proceso de diferenciación y la resersibilidad de dicho proceso. Estos descubrimientos llevaron a que otros autores realizaran la clonación de mamiferos utilizando el núcleo de células somáticas y la obtención de células madre pluripotentes a partir de los embrines que se producen in vitro por el desarrollo de las células totipotentes. Se mencionan varias aplicaciones y las contribuciones de Gurdon para comprender el proceso de reprogramación. S. Yamanaka, en Japón, hace seis años, reprogramó al estado embrionario fibroblastos cutáneos de ratones y humanos adultos insertando mediante vectores retrovirales una combinación de los genes de cuatro factores de transcripción: Oct3/4, Sox2, Klf4 y c-Myc. Las células reprogramadas fueron denominadas células madre pluripotentes inducidas. Utilizando la técnica desarrollada por Yamanaka y otras surgidas a raiz de sus descrubrimientos, miles de personas obtienen ahora células madre pluripotentes inducidas a partir de muchas especies y tejidos, incluyendo seres humanos sanos y enfermos. Las células madre pluripotentes o sus derivadas tienen un amplio potencial de aplicación, entre ellas, estudios de embriología y fisiopatología, modelos de enfermedades, descubrimiento de drogas y terapias celulares

This paper was written to honor J.B Gurdon y S. Yamanaka, 2012 Nobel Prize laureates in Physiology or Medicine for "the discovery that mature cells can be reprogrammed to become pluripotent". Their main scientific contributions and biography are presented in a concise manner. JB Gurdon, in England, showed fifty years ago in amphibians that the transplantation of the nucleus of an intestinal cell to an enucleated egg or oocyte produces a totipotent cell that develops into an embryo and adult frog. This implies that cellular differentiation is reversible and the genome is conserved in that process. The discoveries led to the cloning of mammals by other authors using the nucleus of somatic cells and to obtain pluripotent stem cells in vitro from the embryos produced by development of the totipotent cells. Some applications are considered. Gurdon's contribution to the understanding of the reprogramming process is mentioned. S. Yamanaka six years ago in Japan reprogrammed skin fibroblastis from adult mice and humans to the embryonic state by introducing via retroviral vectors a combination of the genes of 4 transcription factors, Oct3/4. Sox2, Klf4 and c-Myc. The reprogammed cells were named induced pluripontent stem cells. Throusands of people are now producing induced pluripotent stem cells from many tissues and species, including healthy and ill humans, using Yamanaka's methods and other techniques stimulated by his work. Pluripotent stem cells or their derivatives have great potential for a wide range of applications including research in embryology and pathophysiology, disease modeling, drug discovery and cell transplantation therapies

Bioterrorismo e a facilidade de acesso à biotecnologia e seus insumos / Bioterrorism and easy access to biotechnology and its inputs

Os fundamentalismos surgiram no Ocidente a partir de questões religiosas e posteriormente difundiram-se para outras partes do mundo tomando outras conotações, principalmente políticas. As técnicas de manipulação genética difundiram-se pelas universidades, que formam mestres e doutores com os conhecimentos básicos sobre clonagem gênica, que se tornou de domínio público. Todos os insumos para clonagem gênica podem ser adquiridos por meio de catálogos via internet. Podem-se recrutar profissionais fanáticos e com a competência para a manipulação genética de organismos patogênicos, lado perverso da biotecnologia. Os conflitos étnicos, culturais e religiosos estão associados a um cenário de contrastes entre os países ricos e carentes de matéria-prima e aqueles pobres, mas detentores de insumos básicos e energia, e atingem a sua forma mais aguda nos fundamentalismos. Grupos de fanáticos têm pleno acesso a essa biotecnologia. Estariam assim as populações civis vulneráveis aos ataques do bioterrorismo com armas biológicas geneticamente modificadas?.

Fundamentalism arose in the West based in religious matters and afterward diffused to other parts of theworld with other connotations, especially political. Genetic manipulation techniques spread to universities,which has given masters and doctors the basic knowledge on gene cloning, which has become public domain.All inputs for gene cloning may be obtained through online catalogs. Fanatic professionals may be recruited,with qualification for genetic manipulation of pathogenic organisms, the negative side of biotechnology. Eth-nic, cultural and religious conflicts are linked to a series of contrasts between countries that are rich but witha lack of raw materials and the poor countries that possess basic input and energy sources, when it reachesthe highest fundamentalist form. Fanatic groups have complete access to this biotechnology. Are civilian po-pulations in vulnerable to bioterrorist attacks involving genetically modified biological weapons?

Desarrollo de u poxvirus recombinante que exprsa la glicoproteína d del herpeesvirus bovino-1 / Development of a Recombinant Poxvirus Expressing Bovine Herpesvirus-1 Glycoprotein D

El herpesvirus bovino-1 (BHV-1) es un virus de genoma DNA perteneciente a la familia Herpesviridae, el cual afecta al bovino en el que provoca un amplio espectro de manifestaciones clínicas y pérdidas económicas. El principal componente inmunogénico de su envoltura es la glicoproteína D (gD), la cual ha sido caracterizada y utilizada como inmunógeno en distintos sistemas de expresión. El objetivo de este trabajo fue generar un poxvirus recombinante (Raccoonpox [RCN]) que expresara una versión truncada de la gD del BHV-1 para ser usado como inmunógeno. Para ello, se amplificó el gen que codifica para la versión truncada de la gD, la cual se clonó en el plásmido de transferencia pTK/ IRES/tpa que posee sitios de homología a la timidinakinasa del poxvirus, un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) y una señal secretoria (tPA), generando el constructo pTK/gD/IRES/tpa. Para generar el RCN recombinante, se tomaron células BSC-1, se infectaron con una cepa Silvestre del RCN (CDC/V71-I-85A) a un índice de multiplicidad de infección de 0,05 y se transfectaron con el constructo pTK/gD/IRES/tpa; generándose diferentes poblaciones virales con y sin el gen de interés. Para seleccionar los virus recombinantes que expresaban el gen de interés, se realizó una selección de recombinantes negativos para timidina kinasa y positivos para la gD por tres rondas de purificación de placas en monocapas de células RAT-2 las cuales son mutantes para timidina kinasa y en presencia de bromodeoxiuridina. Los virus recombinantes se confirmaron por PCR y secuenciación de nucleótidos y se denominaron RCN-gD.

Bovine Herpesvirus-1 is a DNA virus belonging to the family Herpesviridae, which affects cattle, causing a wide spectrum of clinical manifestations and economic losses. The main immunogenic component is its envelope glycoprotein D (gD), which has been characterized and used as immunogen in different expression systems. The aim of this work was to generate a recombinant poxvirus (Raccoonpox [RCN]) expressing a truncated version of BHV-1 gD to be used as a vaccine. To do this, it was amplified the gene for a truncated version of gD which subsequently was cloned in transfer plasmid PTK/IRES/tpa which has homology to sites of poxvirus thymidine kinase, an internal site of ribosome entry (IRES) and a secretory signal (tPA), generating the construct PTK/gD/IRES/tpa. To generate the recombinant RCN, we took BSC-1 cells and we infected with a wild type RCN (CDC/V71-I-85A) at a multiplicity of infection of 0.05, then cells were transfected with the construct PTK/gD/IRES/tpa, generating different viral populations with and without the gene of interest. To select recombinant viruses expressing the gene of interest, we performed a selection of recombinant thymidine kinase negative and positive for gD by three rounds of plaque purification on RAT-2 cells monolayers which are thymidine kinase null and using bromodeoxyuridine. Recombinant viruses were recovered and confirmed by PCR and nucleotide sequencing and so called RCN-gD.

Clonación de genes por spliced leader a partir de genotecas de expresión de cisticercos de Taenia solium / Spliced leader gene cloning from expression library of Taenia solium cysticerci

La cisticercosis es una enfermedad causada por el estadio larvario (cisticerco) de Taenia solium. El diagnóstico de la enfermedad se ve limitado por la disponibilidad de antígenos del parásito, donde una alternativa sería la clonación de genes codificantes de antígenos. En T. solium, al igual que en otros parásitos, ocurre un mecanismo alternativo en el procesamiento de algunos ARNm, denominado trans-splicing, en el cual una pequeña molécula de ARN conocida como Spliced Leader (SL) es añadida al extremo 5´ de una molécula de pre-ARNm, formando diferentes ARNm maduros que contienen un extremo 5´ común. Debido a las limitaciones que presenta el diagnóstico, además del interés en el estudio de este mecanismo, el objetivo de este trabajo fue clonar moléculas que utilizan este procesamiento posttranscripcional. Para ello, se realizó un cribado mediante PCR a partir de genotecas de expresión de cisticerco de T. solium utilizando como cebador directo TSSL-DW2 y como reverso ZAP-3´UP que hibridan con la secuencia SL y con la del vector, respectivamente. Se obtuvieron productos de ADNc de diferentes tamaños, que fueron clonados en un plásmido de mantenimiento (pGEM-Teasy). Posteriormente, mediante PCR de colonias se verificó la presencia de los insertos y se estimó su tamaño, obteniendo un total de 56 clones de tamaño variable (150-1200 pb). Este diseño permitió la identificación de genes de T. solium que utilizan el mecanismo de trans-splicing; y además de ser una estrategia fácil para clonar moléculas completas, abre camino para futuras investigaciones enfocadas en el diagnóstico de cisticercosis.

Cysticercosis is caused by the larval stage of Taenia solium (cysticercus). The diagnosis of the disease is limited by the availability of parasite antigens; an alternative would be the cloning of gene encoding antigens. In T. solium, as in other parasites, an alternative mechanism in the processing of some mRNAs called trans-splicing occurs, in which a small RNA known as Spliced Leader (SL) is added to the 5´ end of pre-mRNA molecules, forming a common 5´-terminal exon of the mature mRNAs. Due to limitations for diagnosing the disease, in addition to the interest in the study of this mechanism, the aim of this work was to clone molecules that use this posttranscriptional processing. In this study we did a screening by PCR from cDNA library of T. solium cysticerci using the forward primer TSSL-DW2 and the reverse primer ZAP-3´UP that hybridize with SL and vector sequence, respectively. cDNAs of different sizes were obtained that were cloned in maintenance plasmids (pGEM-T-easy). The presence of inserts and their sizes were estimated by colony PCR, obtaining a total of 56 clones of different sizes (500-1200 bp). This design allows the identification of of T. solium genes using the trans-splicing mechanism; and besides being an easy strategy to clone complete molecules, it opens the way for future investigations on the diagnosis of cysticercosis.

Descifrando lasbbases moleculares de la resistencia cuantitativa / Deciphering the Molecular Bases of Quantitative Resistance

Uno de los factores que más afectan los cultivos son las enfermedades ocasionadas por patógenos. La resistencia vegetal ha sido clásicamente dividida en dos tipos: i) completa, vertical o cualitativa que es gobernada por un solo gen e ii) incompleta, horizontal o cuantitativa la cual es gobernada por varios genes. Aunque la resistencia cuantitativa provee resistencia de amplio espectro y es durable, los mecanismos moleculares subyacentes no han sido estudiados en detalle. En esta revisión se propone un modelo basado en co-localización de genes similares a los genes clásicos de resistencia cualitativa con QTLs (Quantitative Trait Loci) para explicar el mecanismo involucrado en el reconocimiento del patógeno durante la resistencia cuantitativa. Además se presenta información acerca del progreso obtenido en los últimos tres años para entender este tipo de resistencia, lo que culminó con la clonación de varios genes asociados a resistencia cuantitativa. En conjunto, estos datos proveen nuevas luces sobre la naturaleza genética de este tipo de resistencia y de cómo puede ser empleada en programas de mejoramiento genético.

Plant pathogens are some of the most important factors affecting crop production. Classically two general types of plant resistance to pathogens have been recognized: i) complete, vertical or qualitative resistance governed by a single gene; and ii) incomplete, horizontal or quantitative resistance, which is governed by several genes. Although quantitative resistance provides broad spectrum and more durable resistance, the underlying molecular mechanism involved in pathogen recognition has not been deeply studied. In this review, we proposed a model to explain the molecular mechanism involved in the pathogen recognition during the quantitative resistance. This is based on the co-localization of similar classical qualitative resistance genes with QTL (Quantitative Trait Loci). In addition, information is presented about the progress made in the last three years towards understanding this complex resistance, which has culminated in the cloning of several quantitative resistance genes. Taken together these data provide new insights about this type of resistance and how we can use it for crop improvement.

Implicaciones éticas de la transgénesis y la clonación / Ethic implications of transgenesis and cloning

La biotecnología, aunque tan antigua como la invención del vino y la fermentación de la cerveza por el hombre, tiene en los años 60 del siglo XX, un importante despegue con las técnicas de biología molecular y clonaje de genes foráneos en organismos unicelulares, y el surgimiento de los primeros medicamentos recombinantes. En la década de 1980 y 1990, se obtiene sorprendentes resultados de transgénesis de animales y plantas y ya finalizando el siglo aparece la clonación ó generación de animales idénticos a partir de células somáticas. En este trabajo se valora críticamente las oportunidades y riesgos de la transgénesis y la clonación en el plano ético actual, teniendo en cuenta la amenaza de los seres clónicos, la responsabilidad social de los científicos, la polarización del sistema científico internacional y los códigos morales, además de la ética del profesional científico cubano que responde al principio de que el futuro de nuestra patria tiene que ser necesariamente un futuro de hombres de ciencia (AU)

Even though Biotechnology is as old as the invention of wine and beer fermentation by men, it experiences an important take off in the 60s, with the development of molecular biology techniques and cloning of strange genes in unicellular organisms, and the emergence of the first recombinant medications. In the decade of 1980 and 1990, surprising results in transgenesis of animals and plants are obtained and by the end of the century cloning or generation of identical animals starting from somatic cells is carried out. In this work the opportunities and risks of transgenesis and cloning are analyzed critically taking into account the current ethical perspective, keeping in mind the threat of cloned beings, the social responsibility of scientists, the polarization of the international scientific system and moral codes, as well as the Cuban science professionals ' ethics that responds to the principle that the future of our homeland is necessarily a future of science men (AU)

Bioética y clonación / Bioethics and Cloning

En la actualidad la clonación posee dos ramas bien definidas: la reproducción del organismo mediante la copia de su genoma y la finalidad terapéutica, que incluye la clonación de órganos y tejidos usados generalmente para el trasplante de órganos dañados por otros en buenas condiciones. El presente trabajo tiene como objetivo explicar las diferentes posturas científicas, legales y sociales sobre la clonación, de manera que puedan ser usadas como herramientas del profesional de la salud en sus investigaciones y dilucidar cómo la bioética enfoca la clonación de forma negativa o ilícita, por las implicaciones sociales y morales que presupone. La clonación terapéutica es considerada importante e interesante desde el punto de vista científico y ético, ya que puede conducir a resolver varios problemas de salud

Today the cloning has two well-defined branches: the reproduction of the Agency through its genome copy and therapeutic purpose including cloning organs and tissues used generally for transplant organs damaged by others in good condition. This paper aims to explain the different positions scientific, legal and social on cloning so can be used as tools for health care research and clarify how bioethics focusing on negative or unlawful way by the social and moral implications presupposes cloning. Therapeutic cloning is considered important and interesting from the point of view scientific and ethical, which can lead to solve various problems of health

Clonaje y caracterización molecular in silico de un transcrito de fosfolipasa A2 aislado del veneno de la serpiente peruana Lachesis muta / Molecular cloning and characterization in silico of phospholipase A2 transcripto isolated from Lachesis muta peruvian snake venom

Objetivo. Aislar y caracterizar in silico un transcrito del gen de fosfolipasa A2 (PLA2) aislado del veneno de Lachesis muta de la Amazonía peruana. Materiales y métodos. Se amplificó el transcrito del gen sPLA2 mediante la técnica de RT-PCR a partir de RNA total utilizando cebadores específicos, el producto de DNA amplificado se insertó en el vector pGEM para su posterior secuenciación. Mediante análisis bioinformático de la secuencia nucleotídica se determinó un marco de lectura abierta de 414 nucleótidos que codifica 138 aminoácidos, incluyendo16 aminoácidos del péptido señal, el peso molecular y el pI fueron de 13 976 kDa y 5,66 respectivamente. Resultados. La secuencia aminoacídica denominada Lm-PLA2- Perú, contiene Asp49, así como Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 importantes para la actividad enzimática. La comparación de Lm-PLA2-Perú con las secuencias aminoacídicas de los bancos de datos mostró 93 por ciento de similitud con las sPLA2 de Lachesis stenophrys y más del 80 por ciento con otras sPLA2 de venenos de la familia Viperidae. El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica del transcrito del gen sPLA2 indica que Lm-PLA2-Perú se agrupa con otras sPLA2 [Asp49] ácidas previamente aisladas del veneno de Bothriechis schlegelii con un 89 por ciento de identidad. El modelaje tridimensional de Lm-PLA2-Perú, presenta una estructura característica de sPLA2 del Grupo II formada por tres hélices-α, una lámina-β, una hélice corta y un lazo de unión con calcio. Conclusión. La secuencia nucleotídica corresponde al primer transcripto del gen de PLA2 clonado a partir del veneno de la serpiente Lachesis muta, que habita en la selva del Perú.

Objective. Isolate and characterize in silico gene phospholipase A2 (PLA2) isolated from Lachesis muta venom of the Peruvian Amazon. Material and methods. Technique RT-PCR from total RNA was using specific primers, the amplified DNA product was inserted into the pGEM vector for subsequent sequencing. By bioinformatic analysis identified an open reading frame of 414 nucleotides that encoded 138 amino acids including a signal peptide of 16 aminoacids, molecular weight and pI were 13 976 kDa and 5.66 respectively. Results. The aminoacid sequence was called Lm-PLA2-Peru, contains an aspartate at position 49, this aminoacid in conjunction with other conserved residues such as Tyr-28, Gly-30, Gly-32, His-48, Tyr52, Asp99 are important for enzymatic activity. The comparison with the amino acid sequence data banks showed of similarity between PLA2 from Lachesis stenophrys (93 percent) and other PLA2 snake venoms and over 80 percent of other sPLA2 family Viperidae venoms. A phylogenetic analysis showed that Lm-PLA2-Peru grouped with other acidic [Asp49] sPLA2 previously isolated from Bothriechis schlegelii venom showing 89 percent nucleotide sequence identity. Finally, the computer modeling indicated that enzyme had the characteristic structure of sPLA2 group II that consisted of three α-helices, a β-wing, a short helix and a calcium-binding loop. Conclusion. The nucleotide sequence corresponding to the first transcript of gene from PLA2 cloned of Lachesis muta venom, snake from the Peruvian rainforest.

Notas sobre judaísmo y bioética / Notes about judaism and bioethics / Notas sobre judaísmo e bioética

El presente artículo revisa algunos temas tradicionales de bioética desde la perspectiva del Judaísmo, refiere respuestas desde las fuentes originales, sus sucesivas exégesis y la legislación judía (Halajá), y revela la relación entre ciencia, fe y defensa de la vida en esta visión religiosa.

The present article reviews some traditional bioethical topics from Jewish perspective, it gives answers derived from original sources, their subsequent exegesis and from Jewish legislation (Halajá), and it unveils relations among science, faith and defense of life according to this religious view.

O presente artigo revisa alguns temas tradicionais de bioética a partir da perspectiva do Judaísmo, em busca de respostas, com base nas fontes originais, nas sucessivas exegeses e na legislação judaica (Halajá), e revela a relação entre ciência, fé e defesa da vida nessa visão religiosa.

Clone: o inferno do si mesmo / Clon: El inferno de uno mismo / The clone: the torment of the same

A autora desenvolve formulações a respeito da clonagem como um mito revelador e em criação. Um mito que auxilia reflexões sobre uma forma específica de relação do sujeito com o outro, de sua relação com o real e de um modo peculiar de pensamento. Utilizando-se do mito e de fragmentos extraídos da clínica, discute-se um conjunto de operações mentais que auxiliam a compreensão de pacientes referidos na literatura psicanalítica como desvitalizados, desobjetalizados, de difícil acesso, borderline. Discute-se também as especificidades do processo transferencial e contratransferencial com esses pacientes.(AU)

La autora desarrolla formulaciones respecto a la clonación como un mito revelador y a la creación. Un mito que auxilia en la reflexión sobre una forma específica de relación de un sujeto con otro, de su relación con lo real y de un modo peculiar de pensamiento. Valiéndose del mito y de fragmentos extraídos de la clínica, se discute un conjunto de operaciones mentales que auxilian en la comprensión de pacientes referidos en la literatura psicoanalítica como desvitalizados, sin objeto, de difícil acceso, borderline. También se discuten las especificidades de los procesos transferenciales y contra-transferenciales con esos pacientes.(AU)

The author develops thoughts about cloning as a myth, in creation, which reveals interesting aspects of some patients. A myth which helps reflections about a specific type of relationship between the subject and the other, about his relationship with reality and about peculiar ways of thinking. The author uses the myth of the clone and some clinical experiences to discuss mental operations which help to understand those patients referred to in the psychoanalytical literature as devitalized, de-objectalized, of difficult access, borderline. Specificities of the transferencial and contratransferencial process with these patients are also discussed.(AU)

Clone: o inferno do si mesmo / Clon: El inferno de uno mismo / The clone: the torment of the same

A autora desenvolve formulações a respeito da clonagem como um mito revelador e em criação. Um mito que auxilia reflexões sobre uma forma específica de relação do sujeito com o outro, de sua relação com o real e de um modo peculiar de pensamento. Utilizando-se do mito e de fragmentos extraídos da clínica, discute-se um conjunto de operações mentais que auxiliam a compreensão de pacientes referidos na literatura psicanalítica como desvitalizados, desobjetalizados, de difícil acesso, borderline. Discute-se também as especificidades do processo transferencial e contratransferencial com esses pacientes.

La autora desarrolla formulaciones respecto a la clonación como un mito revelador y a la creación. Un mito que auxilia en la reflexión sobre una forma específica de relación de un sujeto con otro, de su relación con lo real y de un modo peculiar de pensamiento. Valiéndose del mito y de fragmentos extraídos de la clínica, se discute un conjunto de operaciones mentales que auxilian en la comprensión de pacientes referidos en la literatura psicoanalítica como desvitalizados, sin objeto, de difícil acceso, borderline. También se discuten las especificidades de los procesos transferenciales y contra-transferenciales con esos pacientes.

The author develops thoughts about cloning as a myth, in creation, which reveals interesting aspects of some patients. A myth which helps reflections about a specific type of relationship between the subject and the other, about his relationship with reality and about peculiar ways of thinking. The author uses the myth of the clone and some clinical experiences to discuss mental operations which help to understand those patients referred to in the psychoanalytical literature as devitalized, de-objectalized, of difficult access, borderline. Specificities of the transferencial and contratransferencial process with these patients are also discussed.

Clone: o inferno do si mesmo / Clon: el inferno de uno mismo / The clone: the torment of the same

A autora desenvolve formulações a respeito da clonagem como um mito revelador e em criação. Um mito que auxilia reflexões sobre uma forma específica de relação do sujeito com o outro, de sua relação com o real e de um modo peculiar de pensamento. Utilizando-se do mito e de fragmentos extraídos da clínica, discute-se um conjunto de operações mentais que auxiliam a compreensão de pacientes referidos na literatura psicanalítica como desvitalizados, desobjetalizados, de difícil acesso, borderline. Discute-se também as especificidades do processo transferencial e contratransferencial com esses pacientes.

La autora desarrolla formulaciones respecto a la clonación como un mito revelador y a la creación. Un mito que auxilia en la reflexión sobre una forma específica de relación de un sujeto con otro, de su relación con lo real y de un modo peculiar de pensamiento. Valiéndose del mito y de fragmentos extraídos de la clínica, se discute un conjunto de operaciones mentales que auxilian en la comprensión de pacientes referidos en la literatura psicoanalítica como desvitalizados, sin objeto, de difícil acceso, borderline. También se discuten las especificidades de los procesos transferenciales y contra-transferenciales con esos pacientes.

The author develops thoughts about cloning as a myth, in creation, which reveals interesting aspects of some patients. A myth which helps reflections about a specific type of relationship between the subject and the other, about his relationship with reality and about peculiar ways of thinking. The author uses the myth of the clone and some clinical experiences to discuss mental operations which help to understand those patients referred to in the psychoanalytical literature as devitalized, de-objectalized, of difficult access, borderline. Specificities of the transferencial and contratransferencial process with these patients are also discussed.